免疫膠體金診斷技術 初應用在尿液與血清絨毛膜促性腺的檢測中,后隨著我國技術的不斷發展,有專家學者提出膠體金可用于標記物的替代酶,參與滲濾實驗,在人類免疫缺陷病毒抗體檢測試劑盒的生產中廣泛的應用。金標卡板免疫膠體金診斷技術具備操作方便、等特點,在傳染病病原抗體、妊娠試驗中廣泛的應用,但在獸醫診斷中的應用處于初級階段。
一、免疫膠體金診斷技術的原理
固相載體通過微孔濾膜包被已知抗體或者是抗原,并加入待測樣本,通過毛細管虹吸或者是微孔膜滲濾等作用與包被后的抗體、抗原相結合, 后再與膠體金標記物產生反應?,F階段,免疫膠體金診斷技術在獸醫診斷中的應用分為兩種方法:免疫層析試驗與免疫滲濾試驗。
1、免疫層析試驗 將具備特異性的抗體或者是抗原固定在膜上,并將該范圍選作檢測帶。把膠體金標記物放置于玻璃纖維結合釋放墊中進行干燥,且膠體金標記物兩端分別連接在樣品墊與膜上,膜另外一端連接在吸水墊中。加入液體樣品,通過發生擴散,從而移動,在此作用下,玻璃纖維中的標記物會出現水化,與膠體金標記物發生反應,并向前泳動,一直到檢測線結束,檢測線截獲待測物與標記物,顯示紅色。如果在樣品中部存在待測物,說明其和游離標記物抵達質控線位置,紅色是膠體金和質控線發生反應而顯示紅色。
2、免疫滲濾試驗 固相載體通過微孔濾膜把具備特異性的抗體或者是抗原進行固定,將吸水材料填滿滲濾裝置,并將固定好的固相載體置入,一般情況下,扁形盒上方有小孔,并在試驗過程中,把標本盒金標結合物分別滴在膜中,抗原抗體利用滲濾作用與膜上發生免疫結合并顯色。以待測物為基礎選擇不同的試驗方法,特別是在免疫球蛋白檢測試驗中, 好選擇捕獲法,而抗體檢測選擇問接法。
二、免疫膠體金診斷技術具備的優勢
1、操作簡便 無需儀器設備輔助,利用滲濾試劑盒或者是試紙條就能夠完成試驗,且樣品在簡單處理后就可開展試驗。
2、特異性良好 金標卡板免疫膠體金診斷技術在單克隆抗體的標記中應用較為廣泛,因而具備良好的特異性。
3、靈敏度良好 免疫膠體金診斷技術具備良好的靈敏度,并不受其特異性的影響。有的試驗操作中,靈敏度在1ng/ml或者是略低水平,少數試驗的靈敏度不在該范圍中,利用免疫金銀染色法與生物素親合素系統能夠提高銀加強試驗的敏感度。
4、判定難度低 由于試驗顯色顏色非常明顯,因此可通過肉眼判斷陰、陽性。
5、、 金標卡板免疫膠體金診斷技術在5~10min內就能顯示試驗結果,明顯短于其他方法。